本发明公开了基于纳米抗体检测三唑磷残留的ELISA试剂盒及其应用，所述试剂盒包括盒体、设在盒体内的酶标板以及试剂；其中，酶标板的每个孔包被有三唑磷包被抗原，所述试剂包括抗三唑磷纳米抗体、三唑磷标准溶液、酶标记的二抗、缓冲液PBS、洗涤液PBST、底物液、显色液和反应终止液等。检测过程中，酶标板孔壁上吸附的包被抗原和待测三唑磷相互竞争与抗体反应，通过显色反应观察结果。检测已知浓度的三唑磷并绘制标准曲线，可以推算出待测三唑磷的浓度。本发明的优点是能准确灵敏地检测水、蔬菜中三唑磷残留，样品的前处理过程简单，耗时少，能同时检测大量的样品，样品检测成本远低于传统的仪器检测方法。
